基因敲除服务上海南方模式生物科技发展有限公司

原理     构建以筛选基因新霉素（Neo）取代敲除基因的一个或多个外显子的质粒，转入ES细胞，获得正确发生同源重组的ES克隆。ES细胞进行囊胚注射，获得部分ES来源的嵌合鼠，嵌合鼠与野生型小鼠交配，最终获得来源于重组ES细胞的杂合子小鼠。杂合子小鼠一条染色体上的靶基因exon被Neo基因所取代，杂合子交配获得目的基因失活的纯合子小鼠。

服务周期    7-15个月

原理     根据基因序列设计合成gRNA与Cas9 mRNA共同注射到小鼠受精卵胞质，Cas9核酸酶、gRNA、基因组靶序列结合并切割双链DNA，通过非同源性末端接合（NHEJ）修复途径或片段缺失造成靶基因的移码突变，从而实现基因敲除。NHEJ修复是随机的，可能在同一小鼠体内不同细胞造成的修复结果不同，敲除小鼠需要繁殖一代，获得稳定遗传的敲除杂合子小鼠。

服务周期    5-7个月

 I   ES细胞同源重组技术途径

原理    构建在靶基因序列两端各有一个LoxP序列的打靶载体，转入ES细胞，通过同源重组获得Loxp重组到基因组指定位置的ES细胞，经囊胚注射、嵌合鼠繁殖，最终获得Flox杂合子小鼠。

 

服务周期    9-15个月

 

II  Crispr/Cas技术途径

 

原理    根据基因序列设计合成两个sgRNA，分别针对两个Loxp的插入点，构建含Loxp的同源序列，与Cas9 mRNA共同注射到小鼠受精卵胞质，Cas9核酸酶、sgRNA、基因组靶序列结合并切割双链DNA，以含Loxp同源序列为模版修复基因组DNA，最终获得在待敲除目的DNA序列两端各有一个LoxP序列的Flox小鼠。

 

服务周期    6-9个月