转染上海中乔新舟生物科技有限公司

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技术服务信息

服务名称:转染
服务类别:细胞生物学服务 - 细胞培养服务
价格:询价
允许参观:允许参与实验
所在区域:上海.上海
更新时间:2019/5/17 9:09:00
浏览人数:1108
诚信指数:635点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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上海中乔新舟生物科技有限公司
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技术服务详细描述

目录号:A1001-01
简介:SupertransgeneTM-1是由一种中性脂质体与一种带有阳离子的新型脂质体相配而成。此项基因转染新技术,是通过合理的分子设计,遵循细胞内涵体PH平衡和破坏机制而研发的。此试剂在不同的试剂浓度及不同类型细胞中均具有优质的转染性能,且具极低的细胞毒性作用,是一种非常容易掌握的方法,可用于悬浮和粘附细胞株的暂时性转染,同样也可用于稳定转染而产生细胞株,也适合动物原生细胞的体外和动物体内的基因转染。优势在于对小鼠胚胎干细胞的转染。
形态:SupertransgeneTM-1以液体形式保存。 
储藏:4℃保存。
稳定性:SupertransgeneTM-1在4℃条件下至少保存一年。
优点:1.在大部分细胞中具有非常高的转染效率。
2.在有血清和无血清的培养基中都具有卓越的性能。
3.极低的细胞毒性,最适合于稳定基因转染。
4. 转染方法非常容易掌握,适合所有的实验设计。
5. 对于小鼠胚胎干细胞和原代细胞的转染效率更高。
6.小鼠体内模型实验,高剂量(3 ml/只)亦无毒性作用。
方法:
 用于粘附细胞:在24孔板上以0.5 ml培养基平铺细胞, 密度为5 - 8 x 104/孔且不加抗生素,在37°C, 5% CO2培养箱中培养16-24h后,细胞达到60 – 80%长满盘时开始准备转染。
 
用于小鼠胚胎干细胞:在24孔板上以0.5 ml培养基平铺细胞, 密度为2-3 x 104/孔且不加抗生素,在37°C, 5% CO2培养箱中培养0-1h之内开始准备转染。
 
用于悬浮细胞:在转染前一天将悬浮细胞分开培养于新鲜培养基中,在转染当天,通过离心收取细胞,弃掉培养基,在24孔板上每孔加0.5 ml培养基,接种5.5 – 8.5 x 105个细胞,不添加抗生素,开始准备转染。
 
a). 取一干净的小离心管,加25μl不含血清、蛋白质或抗生素的去离子双蒸水中,加 0.8 µg 的DNA,混匀并震荡几秒钟,保持液体不溅到管壁上。
b). 取另一干净的小管,加25 μl去离子双蒸水,加3- 5 µl的supertransgeneTM-1转染试剂。
c). 将稀释的转染试剂加入到DNA稀释液中,用吸管反复上下混匀6次。
d). 在室温的条件下将转染试剂和DNA溶液孵育15 分钟,形成转染复合物。
e). 立即于每孔中逐滴加入转染混合物,震荡确保每孔中的转染混合物分布均匀。
f).置细胞板于培养箱中培养。
g). 培养有转染混合物的细胞12-24h以后换培养液。
h). 48-72h间检测细胞暂时性转染基因表达产物。
 
当进行稳定转染而产生细胞株时,细胞转染后,应稀释1:4至1:8,加入筛选培养基,置细胞板于培养箱中培养24-72h,以带抗生素的新鲜培养基替代原有培养基。
 
细胞转染条件,DNA,supertransgeneTM-1用量一览表
 

Culture Plate
(细胞板)
MediumVolume
(培养基体积)
DNA(μg) SupertransgeneTM-1(μl) Complexing Volume
(混合物体积)
96-well 100 µl 0.2 – 0.3 (10 μl) 0.8 – 1.2 (10 µl) 20 µl
24-well 500 µl 0.8 – 1.2  (25µl) 3 – 5 (25 µl) 50 µl
6-well 2 ml 3.2 – 4.5  (100µl) 10 – 15 (100 µl) 200 µl
60 mm 4 ml  6 – 8  (200 µl) 18 – 25 (200 µl) 400µl
100 mm 15 ml 9 – 12 (500 µl) 27 – 40 (500 µl) 1 ml
 
备注:SupertrangeneTM-1转染试剂仅用于实验室研究。

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