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流式细胞凋亡、周期检测上海吉凯基因医学科技股份有限公司

银牌供应商 

技术服务信息

服务名称:流式细胞凋亡、周期检测
服务类别:细胞生物学服务 - 流式细胞检测服务
价格:欢迎来电洽询
允许参观:协商决定
所在区域:上海.上海
更新时间:2021/9/14 16:42:00
浏览人数:1293
诚信指数:1051点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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上海吉凯基因医学科技股份有限公司
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上海市浦东新区张江高科技园区爱迪生路332号
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4006210302
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上海·上海
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技术服务详细描述

 

流式细胞凋亡、周期检测


服务流程


 

 


服务说明

 

流式细胞凋亡检测

       吉凯基因可根据客户选择或细胞外源表达的荧光类型,相应提供Annexin V单染或Annexin V & PI双染凋亡检测,满足不同的实验需求。


技术原理

       正常细胞中,***酯酰丝氨酸(PS)主要分布在细胞膜内侧,即与细胞浆相邻的一侧。在细胞发生凋亡的早期,不同类型细胞的PS都会外翻到细胞表面,暴露在细胞膜外侧,这一变化早于细胞皱缩、染色质浓缩、DNA片断化和细胞膜的通透性增加等凋亡现象。Annexin V是一种Ca+依赖的***脂结合蛋白,具有易于结合***脂类的特性,对PS有高度的亲和性,因此,Annexin V标记上荧光素可充当一敏感的探针检测暴露在细胞膜表面的PS,从而检测处于早期凋亡的细胞。

PS 外翻不是早期凋亡细胞独有,也发生在中、晚期凋亡和坏死细胞中。但早期凋亡细胞的细胞膜是完好的,而中、晚凋和坏死细胞的细胞膜完整性已经丧失。***化丙***(Propidium Iodide, PI)是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但凋亡中晚期的细胞和死细胞由于细胞膜通透性的增加,PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将Annexin V 与PI 匹配使用,就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。


吉凯应用实例


   用待研基因shRNA慢病毒感染A549细胞,5天后收集细胞,用APC标记的Annexin Ⅴ染色,经流式细胞仪(Millipore,Guava easyCyte HT)检测,结果显示,shRNA下调目的基因表达后,凋亡细胞显著增多,表明待研基因与A549细胞凋亡显著相关。

 


流式细胞周期检测

    通过流式细胞术检测PI荧光强度直接反映细胞各时相的DNA分布状态,从而计算出各时相的百分率。


技术原理

       细胞周期(cell cycle):是指细胞从前一次分裂结束起到下一次分裂结束为止的活动过程,通常由G0/G1期、S期、G2/M期组成。G0/G1期:二倍体细胞的DNA含量(2N)。S期:DNA开始合成,这时细胞核内DNA的含量介于G1期和G2期之间。G2/M期:DNA复制结束成为4倍体(4N)。

       ***化丙***(Propidium, PI)为插入性核酸荧光染料,能选择性的嵌入核酸DNA或RNA双链螺旋的碱基之间,产生红色荧光,并且荧光强度和所嵌入的核酸含量成正比。细胞周期检测时,首先用RNA 酶将RNA消化排除影响,通过流式细胞术检测PI荧光强度直接反映细胞各时相的DNA分布状态,从而计算出各时相的百分率。


吉凯应用实例

       用待研基因shRNA慢病毒感染U-2OS细胞,5天后收集细胞,PI染色,经流式细胞仪(Millipore,Guava easyCyte HT)检测,结果显示,shRNA下调目的基因表达后,G1期细胞减少(P<0.05), G2期细胞增多(P<0.05),表明待研基因与U-2OS细胞周期显著相关。

       


上海吉凯基因医学科技股份有限公司

地址:上海张江高科技园区爱迪生路332 邮编:201203 

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