蛋白质及多肽质谱鉴定北京博奥晶典生物技术有限公司

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技术服务信息

服务名称:蛋白质及多肽质谱鉴定
服务类别:蛋白相关服务 - 质谱服务
价格:询价
允许参观:不允许参与实验
所在区域:北京.北京
更新时间:2018/8/10 15:28:00
浏览人数:6840
诚信指数:1808点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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北京博奥晶典生物技术有限公司
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技术服务详细描述

蛋白质及多肽质谱鉴定

简介

  博奥生物有限公司蛋白质实验室于2006年开始对外提供多肽和蛋白质测试服务,包括多肽和蛋白质的分子量和序列测定,蛋白种类鉴定。博奥采用串联质谱法(Tandem Mass Spectrometry, MS/MS)鉴定蛋白,可靠性高。蛋白经胰酶消化形成的肽段进入质谱,一级质谱检测多肽分子的大小,然后再将肽段打碎,形成一系列离子即N端离子系列(B系列)和C端碎片离子系列(Y系列)。质谱再检测碎片离子的大小,即二级质谱。将质谱数据与蛋白数据库进行比对,获得肽段的序列,特定的多肽序列对应着特定的蛋白,从而鉴定出待检测蛋白。除了鉴定单个蛋白,我们的液相色谱和质谱联用平台(Liquid Chromatography- Tandem Mass Spectrometry, LC-MS/MS)还具有分析混合蛋白的能力。MALDI-TOF MS(Matrix Assisted Laser Desorption Ionization Time of Flight Mass Spectrometry)是另一种常用的质谱平台,通过肽指纹图谱(Peptide Mass Fingerprinting, PMF)来鉴定蛋白质。MALDI-TOF MS的鉴定结果没有没有氨基酸序列信息,最终得到的是蛋白数据库多个质量相同或相似的候选蛋白列表,相对而言可靠性较低,并且MALDI-TOF MS无法鉴定混合蛋白。

服务流程

1.单个蛋白鉴定

A)用于鉴定纯化的单个蛋白的溶液或粉末,或经过SDS-PAGE(Sodium Dodecyl Sulfate Polyacrylamide Gel Electrophoresis)的单个条带或二维电泳的单个点。
B)蛋白酶解成多肽。
C)液相分离多肽,离子化的多肽进入质谱,母离子检测,母离子裂解成一系列子离子,子离子检测。
D)数据库检索。
E)人工验证,输出报告。

2.蛋白混合物的鉴定

A)用于鉴定含多种蛋白的混合物,根据样品的复杂程度采取不同的策略分离后再进行质谱鉴定。

3.差异蛋白分析

A)相对定量:比较两组细胞/体液中的蛋白,找出差异蛋白。

            

服务优势

采用真正的纳流液相系统,具有更高的灵敏度。

串联质谱,提供序列信息,蛋白鉴定可靠性高。

采用LC-ESI-MS/MS(Liquid Chromatography Electrospray Ionisation Tandem Mass Spectrometry)配置,适用于复杂样品。

鉴定实例

  图2为不同量Apomyoglobin蛋白(Sigma,A8673)SDS-PAGE图。将电泳后的蛋白条带切胶,酶解后使用我们的液相色谱和质谱联用平台检测,结果如表1。质谱结果显示的是红色箭头所指示的位置切下的胶条(32ng)的鉴定结果。即使是考马斯亮蓝染色微弱的条带,仍能得到很好的质谱鉴定结果[表1]。

                             

 

图2 Apomyoglobin蛋白电泳图

表1 质谱鉴定Apomyoglobin蛋白条带(32ng)结果

Reference

Score

Coverage

MW

Accession

Peptide

Myoglobin
[Equus caballus]

90.27

49.35

17072.0

255683511

139

 

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