免疫组化实验武汉博士德生物工程有限公司

技术服务信息

服务名称:免疫组化实验
服务类别:免疫学服务 - 免疫组化/免疫沉淀/Western blot
价格:询价
允许参观:不允许参观
所在区域:湖北.武汉
更新时间:2010/3/29 11:53:00
浏览人数:9772
诚信指数:469点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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武汉博士德生物工程有限公司
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湖北·武汉
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技术服务详细描述

石蜡组织标本处理过程
石蜡组织标本处理过程
 
1.  取材:将动物(如大小鼠)断颈处死后迅速取出所要组织,然后裁成大小为(1cm×1cm×0.5cm)剔除组织上的脂肪和钙化,将组织放入PBS缓冲液中洗涤(直至组织上无血渍为止)
2.  固定:将组织置于4%多聚甲醛固定液中4℃固定,固定时间和组织厚度成正比(每1mm一小时)
3.  脱水:固定后的组织经PBS缓冲液洗涤后(浸泡30分钟×3次)放入乙醇中4度剃度脱水
1)         70%乙醇 4℃ 3~4h
2)         80%乙醇 4℃ 3~4h
3)         90%乙醇 4℃2~3h
4)         95%乙醇Ⅰ 4℃ 2~3h
5)         95%乙醇Ⅱ 4℃ 1~2h
6)         100%乙醇Ⅰ 4℃ 1.5h
7)         100%乙醇Ⅱ 4℃ 1.5h
8)         二甲***Ⅰ 4℃ 0.5~1h
9)         二甲***Ⅱ 4℃ 0.51~1h
10)      石蜡Ⅰ 60℃ 1h
11)      石蜡Ⅱ 60℃ 2h
  以上全过程为18-24h,也可在室温内使用自动脱水机代替。如组织块小,直径小于0.5cm,可用快速石蜡包埋切片,全过程只需4h左右。有些组织在切片时易碎(如肝脏),在脱水时可适当缩短脱水时间
4浸蜡:将组织浸入液态石蜡中(2小时×2次)严格控制浸蜡温度(60—65℃为宜),防止温度过高导致组织蛋白丢失。
5模具包埋:待蜡完全凝固后4℃保存
6切片:要求刀片锋利,切片时尽量避免刀痕与皱折,切片投入50℃左右水浴中,若展片困难时可适度加入几滴乙醇,待完全展开后将其黏附在玻片中央。
7烤片: 60℃烤片30分钟,或37℃恒温箱过夜..烤完后切片标本可长期保存

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