酶活性检测(生化法)上海开阳生物科技有限公司

技术服务信息

服务名称:酶活性检测(生化法)
服务类别:蛋白相关服务 -
价格:1元
允许参观:不允许参与实验
所在区域:上海.上海
更新时间:2013/5/8 8:22:00
浏览人数:2990
诚信指数:55点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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上海开阳生物科技有限公司
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技术服务详细描述

酶活性检测、

 

酶活性检测检测指标包括超氧化物歧化酶SODCuZn+Mn-SOD、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、谷胱甘肽还原酶(GR) 、过氧化氢酶(含过氧化氢H2O2检测)、碱性***酸酶(ALP)、酸性***酸酶(AP)、髓过氧化物酶MPODNA甲基化转移酶活性(DNMT)、凋亡因子家族酶Caspase-3/8/9等。

 

超氧化物歧化酶Superoxide Dismutase, SOD)又称过氧化物歧化酶。SOD属于金属酶,按照结合金属离子种类不同,该酶有以下三种:含铜与锌超氧化物歧化酶(CUZNSOD)、含***超氧化物歧化酶(MN—SOD)和含铁超氧化物歧化酶(Fe—SOD)。SOD主要存在于胞液和线粒体基质中,是防御生物体氧化损伤的一种十分重要的酶。它的作用底物是超氧阴离子自由基O2-,可将其催化歧化为氧气和过氧化氢。这种酶在保护生物细胞免受超氧自由基和由其形成的活性氧类(例如H2O2,·OH)的毒害方面起着重要作用。SOD超氧化物歧化酶检测方法基于通过黄嘌呤(Xanthine/黄嘌呤氧化酶(XOD)体系生成超氧化物阴离子。加入发色基团,发色基团可被由上述体系产生的氧化物阴离子还原成为水溶性的黄色甲染料,这样SOD活性通过抑制发生基团的还原来测定。

 

谷胱甘肽还原酶glutathione reductase, GR)是一种利用NADPH将氧化型谷胱甘肽(GSSG)催化反应成还原型(GSH)的酶。在动植物组织、微生物、酵母中均可以见到。反应是不可逆的。一经透析便会失活,通过添加Mg2+M2+n使之活化。鼠肝脏的酶几乎只能利用NADP作为补酶,但是在人的红血球的酶也利用NAD进行作用。对胱氨酸和高胱氨酸均无作用。谷胱甘肽还原酶催化NADPH依赖的GSSG还原成GSH的反应对维持胞内足够水平的GSHGSH氧化还原循环起着重要作用。胞内必须维持高比例的GSH/GSSG来对抗氧化胁迫。本方法在检测过程中,GR还原GSSG生成GSHGSH5,5’-二硫基(2-对***甲酸)(DTNB)反应,产生TNB2-λmax=405nm),检测灵敏度可达检测0.1-40 mU/ml

 

过氧化氢酶是一种普遍的抗氧化酶,广泛存在于几乎所有的生物体内。其功能是催化过氧化氢的分解,产物为水和氧气。依据本方法检测过程中,过氧化氢酶首先将H2O2分解为水和氧,未被分解的H2O2OxiRed™探针结合,在570 nm波长处可以检测到信号改变,样本中过氧化氢酶的含量与OD读数成反比,根据OD读数以及标准曲线可计算出样本中所含过氧化氢酶的含量。

 

碱性***酸酶(ALP是一种在碱性条件下具有较强活性的水解酶,广泛分布于人体各脏器器官中,并以多种形态存在于血液中,其大多来自肝脏和成骨细胞,其次为肾脏、胎盘、肠、睾丸、胸腺、肺、胎盘及肿瘤。碱性***酸酶不是单一的酶,而是一组同功酶。血清中的ALP主要来自肝脏和骨骼。生长期儿童血清内的大多数来自成骨细胞和生长中的骨软骨细胞,少量来自肝。碱性***酸酶水平的变化与肝脏和骨骼的各种病理状态有关。在儿童生长期和妊娠期,血清中ALP生理性活性增高,骨疾病与肝胆疾病等引起ALP病理性活性增高。在肝胆疾病中引起ALP活性增高的原因包括胆道梗阻,例如因胆结石、肿瘤或炎症造成的胆汁郁积。在传染性肝炎中也可发现ALP活性增高。在骨疾病中,Paget病、骨软化症(佝偻病)、骨转移瘤和甲状旁腺功能亢进等,使成骨活性升高引起ALP活力增高。本方法利用***酸对******酯***酸(pNPP)作为***酸酶的底物,当其被***酸酶去***酸化后呈黄色,在405nm处,测定吸光度可计算出样本中碱性***酸酶的活力。

 

髓过氧化物酶(myeloperoxidaseMPO)又称过氧化物酶,是一种重要的含铁溶酶体,存在于髓系细胞(主要是中性粒细胞、单核细胞和某些巨噬细胞)的嗜***胺蓝颗粒中,是髓细胞的特异性标志,随着对MPO研究的深入,人们发现MPO基因多态性导致个体对一些疾病易感性的差异,与人类多种疾病的发生、发展密切相关。MPO的主要功能是在吞噬细胞内杀灭微生物,利用过氧化氢和氯离子产生次***盐,并形成具有氧化能力的自由基。构成MPO–H2O2–卤素系统。许多研究发现,MPO不仅能杀灭吞噬于细胞内的微生物,而且可释放到细胞外,破坏多种靶物质,如肿瘤细胞、血小板、NK细胞、原虫、毒素等,对机体产生和调节炎症反应等多方面发挥作用。然而,在特定条件下,MPO催化反应生成过量的氧化剂(HOCl3–氯化酪氨酸、酪氨酰基、***酪氨酸等),超过局部抗氧化剂的防御反应时,就会导致氧化应激和氧化性组织损伤。MPO还参与调节炎症反应的许多过程,MPO缺陷的中性粒细胞因过量的注入炎症部位而发生氧化反应,大量的超氧化物和氧化物形成,造成炎症部位组织细胞损伤。此外还有学者发现MPO能与DNA牢固结合形成复合物,有效保护DNA防止其在氧化过程中受损,从而保证髓系细胞的正常分化成熟及功能。本检测利用MPO催化H2O2Cl-产生次***,次***与牛磺酸反应形成牛磺酸氯胺,后者与相应的探针结合可以在412 nm被检测到信号的原理检测MPO的含量,最低可以检测到0.05 mU/每样本含量的MPO

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