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confocal激光共聚焦技术服务

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产品名称: confocal激光共聚焦技术服务

英文名称: confocal

产品编号: HL004

产品价格: 2500

产品产地: null

品牌商标: null

更新时间: 2023-09-21T16:14:31

使用范围: null

上海鸿立生物技术有限公司
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免疫荧光,激光共聚焦,病毒包装,MTT, Transwell 等单项实验服务,并有能力承接肿瘤,神经等方面的实验课题,帮助客户完成实验构思,操作及英文文章润笔等专项服务
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 激光扫描共聚焦显微镜
共聚焦显微镜原理
利用激光扫描束通过光栅针孔形成点光源,在荧光标记标本的焦平面上逐点扫描,光信号经过处理分析形成图像。
激光光源的光栅针孔和探测针孔对物镜焦平面是共轭的,焦平面以外的点不会成像,经逐点扫描后才形成整个标本的光学切片(Optic section)。
 
共聚焦显微镜基本结构
1.荧光显微镜
2.激光器:
                  405nm激光器、Ar离子激光器(458nm,488nm,514nm)
3.扫描头:
                  荧光探测器、透射探测器、META探测器
4.系统控制塔
                  扫描头控制、激光控制、数据通信
5.电脑及显示器
 
优点:
避免了传统荧光显微照片的分辨率较低,标本细微结构的成像不够清晰的缺点。
 
常见用途:
1. 高精度荧光显微镜
         2. 三维图像构建
         3. 多荧光标记图像
 
主要生物学应用
1. 组织和细胞中荧光标记分子的检测
  细胞结构、受体、细胞器结构和分布变化、细胞凋亡等
2. 细胞内离子浓度及变化的检测
3. 细胞迁移和生长的观察
4. 图像的重组
 
共聚焦显微镜的简明操作
实验前:
1.开启共聚焦显微镜系统总开关(会听到显微镜自检声)
2.开启显示器,电脑
3.预热10分钟
4.开启相关软件,进入“start expert mode”(系统自检,将会在即听到显微镜自检声)
5.打开汞灯开关
6.点击软件工具栏中,“laser”图标,开启所需要的激光。激光开启后,关掉该窗口。
7.点击“config”,设置系统成像光路
8.点击“scan”,设置扫描三叔,控制探测器的负高压,针孔(pinhole)的大小,扫描速度,缩放大小,激光强度等参数。
9.点击“mode”选择扫描像素精度,扫描速度,数据存储位数,平均次数,缩放大小等
实验中:
1.实验过程中,经常需要先用显微镜找到样品,再用共聚焦来扫描图像,先选择显微镜观察模式,点击“LSM”为扫描图像模式。
2.显微镜的操作可以用软件实现,点击“显微镜”图标可以看到物镜,滤片,荧光,透射光的操作按钮。也可以直接操作显微镜。
3.调焦
                   1.放样品时注意玻片不要碰到物镜表面,以免损坏镜头。
2.在找焦距的时候,应先用低倍镜(5X或10X)粗调,再细调。操作中不应太快,太急,以免物镜顶住样片,损坏镜头(特别是在使用高倍物镜时,更应小心!)。
                   3.调焦过程中,当听到报警声时,说明已经调到最低点,请立刻停止,并反向调节。
4.实验时,请将样品表面的液体擦干,避免滴到镜头上,污染镜头。使用油镜时,滴油不宜过多,使用完毕后,要及时清洗镜头。
4.扫描图像
                   1.在扫描图像之前,请务必关掉汞灯的“shutter”,并点击“LSM”图标,然后开
                   始扫描,这样有利于仪器的寿命。
                   2.在“scan”和“mode”窗口中设置好初步的扫描参数。
5.图像处理
            通俗地说,就是使图像上亮的地方更亮,暗的地方更暗
                   1.这项工作你可以用photoshop等图像处理软件完成。
                   2.或者,共聚焦系统自带的软件,进行一些简单的处理。
实验后:
关机流程
1.从载物台上拿走样品
2.关闭汞灯开关
3.关闭激光。
注:Ar离子激光需要先点击“standby”,将“output power”降到最低,点击“off”关闭激光。一定要等到status显示“connected”才可以退出软件和关闭电源。其他的激光器直接点击“off”即可。
4.等待激光器彻底关闭后,退出软件
5.关闭电脑,显示器
6.关闭系统总开关,“off”
 

如下是经典的细胞免疫荧光双染图片,两个蛋白在细胞胞浆共表达,两个抗体分别是FITC绿色和TRITC红色标记,经

confocal拍摄共表达后呈黄色

 

如下是蛋白在细胞膜上表达的confocal图片