细胞增殖实验和元生物技术(上海)股份有限公司

技术服务信息

服务名称:细胞增殖实验
服务类别:细胞生物学服务 - 细胞培养服务
价格:2000元
允许参观:允许参与实验
所在区域:上海.上海
更新时间:2018/3/6 10:48:00
浏览人数:1404
诚信指数:891点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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和元生物技术(上海)股份有限公司
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技术服务详细描述

细胞增殖实验

摘要:在293T细胞中过表达human Oct-4基因, 通过CCK-8方法对Oct-4过表达细胞组、空细胞组与阴性对照组的细胞增殖进行定量,研究Oct-4基因对293T细胞增殖能力的影响。实验结果显示Oct-4基因的表达促进293T细胞的增殖能力。为进一步深入研究Oct-4基因的功能提供实验数据。
关键词:Oct-4,CCK¬¬-8,细胞增殖,293T

一、 实验原理
细胞增殖是生物体的重要生命特征,细胞以分裂的方式进行增殖。单细胞生物,以细胞分裂的方式产生新的个体。多细胞生物,以细胞分裂的方式产生新的细胞,用来补充体内衰老和死亡的细胞;同时,多细胞生物可以由一个受精卵,经过细胞的分裂和分化,最终发育成一个新的多细胞个体。通过细胞分裂,可以将复制的遗传物质,平均地分配到两个子细胞中去。细胞增殖是生物体生长、发育、繁殖和遗传的基础。细胞增殖的研究方法有很多,主要包括:BrdU,EdU,CCK-8等方法。

二、 实验目的
用质粒Oct-4-EGFP转染后的细胞与正常细胞组、阴性对照组进行比较分析,考察Oct-4基因对细胞的增殖能力产生的影响。采用CCK-8 法对3组细胞进行比较分析。

三、 实验步骤
实验共分以下5个主要步骤:
1. 收集细胞:
收集细胞:将293T细胞消化后制成单细胞悬液,计数后,每组细胞配成一定浓度的单细胞悬液。
2. 细胞铺板:
细胞配成2×104cell/ml后,每孔铺100μl细胞,即2000cell/well。一般每个样品设5~6个复孔,边缘孔加100μl无菌水或者PBS。37℃,5%CO2培养箱中培养。
3. 质粒转染:
     16h后,按照转染试剂说明书转染细胞(0.2μg质粒,0.5μl和元生物转染试剂)。
4. 细胞培养6、24、48、72h后CCK-8处理,酶标仪检测:
转染后, 在每个检测时间点加入10μl的CCK-8于孔中,无需换液。3h后,酶标仪检测450nm OD值。
5. 统计分析:
GraphPad Prism(Ver5,GraphPad Software) 作图,并进行双侧t检验。

四、 实验结果
                                                    表1. 293T过表达Oct-4基因CCK-8检测数据(平均值,每组五次重复)

                                 

 

 

 

 

                                                   

                                                      图1. 过表达Oct-4对293T细胞增殖能力的影响


结论:从实验结果统计分析可以发现,293T细胞在过表达Oct-4-EGFP后,72h时增殖能力均高于空细胞组以及对照组(p<0.001)。

五、 参考文献
1. Ishiyama M, Tominaga H, Shiga M, Sasamoto K, Ohkura Y, Ueno K. A combined assay of cell viability and in vitro cytotoxicity with a highly water-soluble tetrazolium salt, neutral red and crystal violet. Biol Pharm Bull. 1996 Nov;19(11):1518-20.
2. Ishiyama M, Miyazono Y, Sasamoto K, Ohkura Y, Ueno K. A highly water-soluble disulfonated tetrazolium salt as a chromogenic indicator for NADH as well as cell viability. Talanta. 1997 Jul;44(7):1299-305.
3. Isobe I, Michikawa M, Yanagisawa K. Enhancement of MTT, a tetrazolium salt, exocytosis by amyloid beta-protein and chloroquine in cultured rat astrocytes. Neurosci Lett. 1999 May 7;266(2):129-32.
4. Matsuoka M, Wispriyono B, Igisu H. Increased cytotoxicity of cadmium in fibroblasts lacking c-fos. Biochem Pharmacol. 2000 Jun 15;59(12):1573-6.
5. Bai Y, Suzuki AK, Sagai M. The cytotoxic effects of diesel exhaust particles on human pulmonary artery endothelial cells in vitro: role of active oxygen species. Free Radic Biol Med. 2001 Mar 1;30(5):555-62.
6. Mousses S, Wagner U, Chen Y, Kim JW, Bubendorf L, Bittner M, Pretlow T, Elkahloun AG, Trepel JB, Kallioniemi OP. Failure of hormone therapy in prostate cancer involves systematic restoration of androgen responsive genes and activation of rapamycin sensitive signaling. Oncogene. 2001 Oct 11;20(46):6718-23.
7. Kanemura Y, Mori H, Kobayashi S, Islam O, Kodama E, Yamamoto A, Nakanishi Y, Arita N, Yamasaki M, Okano H, Hara M, Miyake J. Evaluation of in vitro proliferative activity of human fetal neural stem/progenitor cells using indirect measurements of viable cells based on cellular metabolic activity. J Neurosci Res. 2002 Sep 15;69(6):869-79.
8. Uchida E, Mizuguchi H, Ishii-Watabe A, Hayakawa T. Comparison of the efficiency and safety of non-viral vector-mediated gene transfer into a wide range of human cells. Biol Pharm Bull. 2002 Jul;25(7):891-7.
9. Yoshimura K, Tanimoto A, Abe T, Ogawa M, Yutsudo T, Kashimura M, Yoshida S. Shiga toxin 1 and 2 induce apoptosis in the amniotic cell line WISH. J Soc Gynecol Investig. 2002 Jan-Feb;9(1):22-6.

 

 

 

 

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