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远慕生物: elisa测定法测定抗体

作者:上海远慕生物科技有限公司 2016-12-05T00:00 (访问量:2162)

 

关键词:抗原-抗体 elisa 酶联免疫 试剂盒检测试剂盒

 

原理

其基本原理可概括为:将特异的抗原-抗体免疫学反应和酶学催化反应相结合,以酶促反应的放大作用来显示初级免疫学反应。因此,酶免疫技术一般均有两部分组成,即一次或数次免疫学反应和一次酶促反应。抗原、抗体发生特异结合过程中,设法引入酶结合物,如酶标记的抗抗体,然后加入酶的底物,在酶催化下生成有色产物,反映出被测定抗原或抗体的量。


操作流程、类型及特点

操作流程:

检测抗体多用间接型elisa。以纯化抗原包被载体,经4℃过夜,以无关蛋白封闭至少2小时以上,加入待测样品,室温孵育1小时,洗涤干净后加酶标抗体,再经室温孵育、洗涤后,以底物显色,显色到一定程度终止反应,在酶标仪上读结果或以肉眼判断。

类型:elisa具体方法的类型繁多,试剂的标准化问题还未最后解决,温育的时间、温度、洗涤液的种类及洗涤次数等都是影响测定的因素。但参考以上基本过程,无论怎样变化,均离不开抗原-抗体反应、酶标抗体的免疫学反应及酶催化作用。

特点:1、敏感性高,可检出浓度在ug~mg/ml水平;2、特异性强;3、重复性好;4、快速、简便、廉价。


实验条件

固相载体:可作为固相载体的物质很多,如:纤维素、聚丙烯酰胺、聚苯乙烯、聚丙烯、交联葡聚糖、玻璃、硅橡胶、琼脂糖凝胶等。可以各种形式出现;试管、微量反应板凹孔、小珠.....。最常用的是聚苯乙烯制品,其吸附性最好。固相包被的机制一般不外乎物理吸附和共价交联,

封闭:以无关蛋白占据载体上未被包被的空隙,常用的封闭液是1%牛血清白蛋白或10%小牛血清。

待测样品:稀释度要合适,浓度太大会发生非特异性吸附造成假阳性,过分稀释会影响抗原-抗体之间的免疫学反应。选择最适稀释度,在实验体系中取光密度在1.0左右的稀释度为宜。

酶结合物:使用高质量的酶结合物是elisa成功的关键。


注意事项

酶联免疫技术的试剂标准化问题尚未完全解决,温育过程的时间、温度、洗涤液的种类及洗涤次数都是影响最后测定的因素。为使实验得到满意的结果,在操作过程中应作到

1、每次试验都必须设阳性和阴性对照。

2、封闭要完全。

3、洗涤要测定。

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