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远慕告知您ELISA最基本的操作原理!

作者:上海远慕生物科技有限公司 2016-12-07T15:10 (访问量:3493)

 

    ELISA最基本的操作原理:


    本试验同时设标准阴、阳性血清对照、兔抗AP2型阳性对照、空白对照。


    常用的ELISA法有双抗体夹心法和间接法,前者用于检测大分子抗原,后者用于测定特异抗体。酶联免疫吸附试验:是酶免疫测定技术中应用最广的技术。其基本方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体(聚苯乙烯微量反应板)表面,使酶标记的抗原-抗体反应在固相表面进行,用洗涤法将液相中的游离成分洗除。


    1、阻断ELISA:
    本法主要用于检测型特异性抗体。该方法现已成为猪传染性胃肠炎(TGE)、猪伪狂犬病(PR)及猪胸膜肺炎(AP)的主要检测方法。
    下面以AP2型抗体的阻断ELISA检测法为例介绍其操作程序:


    首先将100μlAP2型工作量抗原包被→4℃过夜,洗涤三次、抛干;然后加工作量1:4稀释被检猪血清100μl→37℃60分钟,洗涤三次、抛干;接着加100μl工作量兔抗AP2型血清→37℃30分钟,洗涤三次、抛干;最后加100μlOPD底物液→37℃20分钟,加终止液用ELISA检测仪测定OD值。


    2、竞争ELISA:此法主要用于测定小分子抗原及半抗原,其原理类似于放射免疫测定。


    其基本程序为:抗体包被→4℃过夜,洗涤三次、抛干。加入待检抗原及一定量的酶标抗原(对照孔仅加酶标抗原)→37℃60分钟,洗涤三次、抛干加底物液→37℃20分钟,加终止液用ELISA检测仪测定OD值。


    被结合的酶标抗原的量由酶催化底物反应产生有色产物的量来确定,如果待检溶液中抗原越多,被结合的标记抗原的量就越少,有色产物就减少,这样根据有色产物的变化就可求出未知抗原的量。此法的优点在于快速、特异性高、且可用于小分子抗原及半抗原的检测;其主要不足在于每种抗原都要进行酶标记,而且因为抗原的结构不同,还需应用不同的结合方法。此外试验中应用酶标抗原的量较多。

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