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清洗与灭菌如何处理?

作者:上海远慕生物科技有限公司 2016-04-29T00:00 (访问量:1547)

清洗与灭菌如何处理?

一、实验目的

能独立地进行用于细胞培养的各种器皿的清洗与消毒,掌握干热灭菌法、湿热灭菌法和滤过除菌法的操作,了解化学消毒法的使用方法。

二、实验原理

清洗与消毒是组织培养实验的第一步,是组织培养中工作量最大,也是最基本的步骤。体外培养细胞所使用的各种玻璃或塑料器皿对清洁和无菌的要求程度很高。细胞养不好与清洗不彻底有很大关系。清洗后的玻璃器皿,不仅要求干净透明,无油迹,而且不能残留任何物质。如有毒的化学物质,哪怕残留0.1个,也可能影响细胞生长。灭菌手段的选择十分重要,对不同的物品需采用不同的灭菌方法。假如选用的方法不对,即使达到了无菌却使被灭菌药品丧失了营养价值、生物学特性或其他使用价值也不行。以下在每种灭菌步骤中都介绍其使用范围。

三、实验材料、用品

材料:无臭氧型紫外灯,微孔滤膜(直径25):孔径为0.22μm,微孔滤膜(直径90):孔径为0.22 μm,过滤器(直径25)。

药品:70%或75%酒精,0.1%新洁尔灭,煤酚皂溶液(来苏儿水),0.5%过氧乙酸,乳酸,37%甲醛,高**钾,NaOH,盐酸,重铬酸钾,浓硫酸(工业),DEPC水[体积分数0.1%的焦炭酸二乙酯(diethylpyroearbonate)]。

仪器:超净台,干燥箱,高压锅,过滤器,过滤泵。

四、实验步骤

(一)清洗

1.新玻璃器皿的清洗先用自来水刷洗,再浸泡5%稀盐酸以中和玻璃表面的碱性物质和其他有害物质。

2.使用过的玻璃器皿的清洗

(1)使用过的培养用品应立即浸入清水,避免干涸难洗。

(2)用洗涤剂清洗玻璃器皿,自来水清洗数遍,倒置自然干燥。

(3)浸酸性洗液过夜。

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