组织样本样本做ELISA实验如何减少实验误差-分析方法-资讯-生物在线

组织样本样本做ELISA实验如何减少实验误差

作者:上海远慕生物科技有限公司 2015-12-31T00:00 (访问量:2624)

    组织样本样本做ELISA实验如何减少实验误差


    常会有来自学校客户咨询:用动物组织样本做ELISA时实验,如何确定排除检测误差?它与westernblot定量哪个实验结果更可靠?

    远慕资深技术解析:

    一、定量检测的话肯定是选ELISA。Westernblot只是一个半定量的实验方法。

    二、关于排除检测误差:

    1)实验人员一定要选好合适的内参,比如可以测目标蛋白/总蛋白,则内参是总蛋白量,如果使用目标蛋白/总组织重量,则很不准确,因为抽提过程的效率不稳定,即每克组织能够提取出来的蛋白量不固定,而且每个组织含水/含不相干的组织量也不同。建议可以参考相关文献来选择内参。

    2)最普通的查验误差的办法,每个试样多测几个孔。一般至少两个,三个更好。确定每个孔读数一致或非常相近,则知道结果比较可信。

    组织样本的处理原则:

    1,称取的组织重量不能低于50mg。

    3,组织在匀浆器匀浆过程中,匀浆液应该分2次加进去,这样匀浆更充分。

    4,充分匀浆完成后离心取上清,离心机的转数选取2000-3000转每分,转数不宜超过5000.离心时间为15-30分钟!

    2,匀浆的比例按照10%,即1g组织加9ml的匀浆液,匀浆液一般选取PBS(PH=7.2-7.4)

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